Table of Contents
Godkänd
Om du kanske ser pcr-optimering och felsökningsfelmeddelanden på din dator, betala ut dessa felsökningstips.Många relaterade till de föredragna problemen med PCR såväl som RT-PCR detekteras vanligtvis under agarosgelelektroforesen, vilket indikerar svarsprodukterna. Dessa inkluderar frånvaron av det förväntade underhålls- eller amplifieringsgodset, närvaron av icke-specifika produkter, höga mängder utsmetande och närvaron av ett helt nytt primer-dimerband.
Forntida PCR diagnostiserar problem med reaktionskomponenter också, ännu viktigare, amplifieringsprotokoll genom att producera gelen. Relaterade ämnen: PCR-enheter, PCR-reagenser, utveckling av PCR-analyser och därav PCR-optimering och -analys.
Steg 9 – Denaturering.Steg 2 – Glöd.Det andra intervallet är expansion.Steg 4 – elektroforesanalys.
Arbeta i ett tilldelat område.Förvara PCR-reagenser och PCR-tillskott separat.Alikvot.Förvara PCR-rör/spetsar/skåp separat.Dra inte isär filmen från slangen utomhus.Använd bara kärnmixern och lägg till stommen sist.Träna andra.
Mascuch SJ, Fakhretaha-Aval S, Bowman JC, Ma MTH, Thomas G, Bommarius B, Ito C, Zhao L, Newnam GP, Matange KR, Thapa HR, Barlow B, Donegan RK, Nguyen NA, Saccuzzo EG, Obianyor KT, Karunakaran SK, P llet P., Rothschild-Mancinelli B., Mestre-Fos S., Gut-Metzler R., Bryksin AV, Petrov AS, Hazell M., Ibberson KB, Penev PI Mannino R.G., Lam V.A., Garcia A.J., Kubanek D., Agarwal V., Hud N.V., Glass J.B., Williams L.D., Lieberman R.L. Maskuh S.J. jämlikhet al. JBiolChem. 2020-11-13;295(46):15438-15453. doi: 10.1074/jbc.RA120.015434. Publicerad online 3 september 2020 JBiolChem. 2020 PMID: 32883809 Gratis PMC-objekt.
PCR-optimering behöver en hårfin balans mellan sortering relaterad till att förstärka specifika produkter och bekämpa hur produktionen av icke-specifika produkter. Fokus för denna studie var att matcha vilka parametrar som påverkar effektiviteten som specificitet av DNA-amplifiering.
Undvik sekvenseringsproblem.Kontrollera primerhomologi.Spel för nybörjare T m.Avsluta med G eller C.Kom inte ihåg att inkludera spacers för kloning/montering anslutna isotermiska restriktionsenzymer.Behåll en balanserad koncentration för nybörjare.
Mascuch SJ, Fakhretaha-Aval S, Bowman JC, Ma MTH, Thomas G, Bommarius B, Ito C, Zhao L, Newnam GP, Matange KR, Thapa HR, Barlow B, Donegan RK, Nguyen NA, Saccuzzo EG, Obianyor KT, Karunakaran SK, Pollet P., Rothschild-Mancinelli B., Mestre-Fos S., Gut-Metzler R., Bryksin AV, Petrov AS, Hazell M. ., Ibberson KB, Penev PI, Mannino RG, Lam VA, Garcia AJ, Kubanek DM Agarwal V., Khad N.V., Glass J.B., Williams L.D., Lieberman R.L. Maskuh S.J. et al. medRxiv. 1 september 2020: 2020/07/29 20163949. doi: 10.1101/2020.07.29.20163949. Form. medRxiv. 2020 PMID: 32766604 Gratis PMC-objekt. Uppdatering.
Godkänd
ASR Pro-reparationsverktyget är lösningen för en Windows-dator som kör långsamt, har registerproblem eller är infekterad med skadlig programvara. Detta kraftfulla och lättanvända verktyg kan snabbt diagnostisera och fixa din dator, öka prestandan, optimera minnet och förbättra säkerheten i processen. Lider inte av en trög dator längre - prova ASR Pro idag!
Cold-Protocol Pring Harb; 2009; doi:10.1101/pdb.ip66
Följande manual kan användas för att felsöka PCR-reaktioner. Använd vår Tm-kalkylator för att experimentera med procedurerna och besök här för att optimera dina börvärden.
| Titta | Möjlig orsak | Lösning |
|---|---|---|
| Sekvensfel | Lågprecisionspolymeras | |
| icke-optimala förhållanden | ||
| Obalanserade nukleotidkoncentrationer | ||
| Mall-DNA skadades också | ||
| Den begärda sekvensen skulle sannolikt vara farlig för värden | ||
| Ogiltig alternativstorlek | Fel förvärmningstemperatur | |
| Inläsningsfel | ||
| Felaktig Mg-koncentration | ||
| Kärnkontamination | ||
| Inga produkter | Fel förvärmningstemperatur | |
| Regeringsvillfarelse | ||
| Dålig primer så kan vara specifik | ||
| Otillräcklig primerkoncentration | ||
| Saknad reaktionskomponent | ||
| Suboptimala reaktionsförhållanden | ||
| Låg mycket bra designmall | ||
| Närvaro kopplad till inhibitorn under hela reaktionen | ||
| Inte tillräckligt med loopar | ||
| Felaktig programmering av vintercykler | ||
| Variabel blocktemperatur | ||
| Kontamination av reaktionskärl eller lösningar |
||
| Komplex modell |
