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Approuvé
Si vous constatez que le message d’erreur d’optimisation et de dépannage pcr s’affiche toujours sur votre PC, consultez ces conseils de dépannage.Bon nombre des difficultés préférées avec la PCR et la RT-PCR sont détectées lors de l’électrophorèse sur gel d’agarose, indique les produits de réaction. Ceux-ci augmentent l’absence du produit d’assistance ou d’amplification attendu, la présence associée de produits non spécifiques, un maculage excessif, et je dirais la présence d’une nouvelle bande amorce-dimère.
La PCR ancienne diagnostique les problèmes en utilisant des composants de réaction et, plus important encore, des protocoles solides en exécutant le gel. Sujets connexes : outils PCR, réactifs PCR, développement de tests PCR et donc marketing, publicité et test PCR.
Étape 1 – Dénaturation.Étape quelques – Glow.La deuxième étape est l’expansion.Septième étape – analyse par électrophorèse.
Travailler sur une zone désignée.Stockez séparément les réactifs PCR et les produits PCR.Aliquote.Conservez les tubes PCR et les embouts/portoirs séparément.Ne décollez pas le film des tubes à l’extérieur.Utilisez simplement le mélangeur principal et ajoutez un peu de mise en page en dernier.Former les autres.
Mascuch SJ, Fakhretaha-Aval S, Bowman JC, Ma MTH, Thomas G, Bommarius B, Ito C, Zhao L, Newnam GP, Matange KR, Thapa HR, Barlow B, Donegan RK, Nguyen NA, Saccuzzo EG, Obianyor KT, Karunakaran SK, P llet P., Rothschild-Mancinelli B., Mestre-Fos S., Gut-Metzler R., Bryksin AV, Petrov AS, Hazell M., Ibberson KB, Penev PI , Mannino R.G., Lam V.A., Garcia A.J., Kubanek D., Agarwal V., Hud N.V., Glass J.B., Williams L.D., Lieberman R.L. Maskuh S.J. et coll. JBiolChem. 2020-11-13 ;295(46):15438-15453. doi : 10.1074/jbc.RA120.015434. Publié sur le web le 3 septembre 2020 JBiolChem. 2020 PMID : 32883809 Article PMC gratuit.
L’optimisation de la PCR nécessite une distinction délicate entre une sorte d’amplification d’équipements spécifiques et la lutte contre la production de produits non spécifiques. Le but de cette lecture était d’évaluer quels paramètres perturbaient l’efficacité et la spécificité de l’amplification de l’ADN.
Évitez les problèmes de séquençage.Vérifiez l’homologie des débutants.Jeu pour débutants T m.Terminez par G ou C.N’oubliez pas d’inclure des espaceurs pour le clonage/assemblage d’enzymes de limitation isotherme.Maintenir une concentration d’apprêt équilibrée.
Mascuch SJ, Fakhretaha-Aval S, Bowman JC, Ma MTH, Thomas G, Bommarius B, Ito C, Zhao L, Newnam GP, Matange KR, Thapa HR, Barlow B, Donegan RK, Nguyen NA, Saccuzzo EG, Obianyor KT, Karunakaran SK, Pollet P., Rothschild-Mancinelli B., Mestre-Fos S., Gut-Metzler R., Bryksin AV, Petrov AS, Hazell M ., Ibberson KB, Penev PI, Mannino RG, Lam VA, Garcia AJ, Kubanek DM , Agarwal V., Khad N.V., Glass J.B., Williams L.D., Lieberman R.L. Maskuh S.J. et coll. medRxiv. 1er septembre 2020 : 2020.07.29.20163949. doi : 10.1101/2020.07.29.20163949. Former. medRxiv. 2020 PMID : 32766604 Article PMC gratuit. Mettre à jour.
Approuvé
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Protocol Pring Harb ; 2009 ; doi:10.1101/pdb.ip66
Le guide suivant peut être essayé pour dépanner les réactions PCR. Utilisez le meilleur calculateur de Tm pour expérimenter incontestablement les procédures et cliquez ici pour améliorer vos consignes.
Regarder | Cause possible | Solution |
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Erreur de séquence | Polymérase de faible précision | |
conditions non optimales | ||
Concentrations de nucléotides déséquilibrées | ||
L’ADN du modèle était toujours endommagé | ||
La séquence demandée peut être dangereuse pour gagner l’hôte | ||
Taille de produit non valide | Mauvaise température de préchauffage | |
Erreur de chargement | ||
Concentration de Mg incorrecte | ||
Contamination par les nucléases | ||
Aucun produit | Mauvaise température de préchauffage | |
Illusion du gouvernement | ||
Mauvaise introduction qui peut sembler spécifique | ||
Concentration 101 insuffisante | ||
Composant de réaction manquant | ||
Réponse sous-optimale aux conditions | ||
Modèle de conception de mauvaise qualité | ||
Présence de l’inhibiteur tout au long de la réaction | ||
Pas assez de boucles | ||
Programmation incorrecte du thermocycleur | ||
Température de bloc variable | ||
Contamination des types de récipients de réaction ou solution |
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Modèle complexe |